Espermiograma

No es el estudio mas completo pero es recomendable. Existen diferentes tipos de espermiogramas , unos evalúan la viabilidad espermática (si esta vivo o no ), otros evalúan la morfología , etc. Hay espermiogramas de campo o de rutina y otros en laboratorio con estudios mas elaborados. Hay un aparato computarizado (espermoanalizador) que sirve para hacer espermiogramas. También se hacen otras pruebas como la de la fertilidad in vitro ( utilizan pruebas de motilidad espermática , contando el numero de espermatozoides que fertilizan ovocitos de hámster; se hace en humanos), o de aglutinación, o de hiposmosis (prueba importante para ver si esta afectada la permeabilidad de la membrana plasmática).

 

 

a - volumen  :  depende de

·      raza : de origen lechero dan mas volumen

·      edad : aumenta con la edad hasta los 9 años mas o menos

·      alimentación : el verdeo bueno a campo da los mejores resultados

·      especie : las de eyaculación intrauterina dan mas volumen con menor concentración (ej cerdo, padrillo, perro), las de eyaculación intravaginal es menor volumen pero mayor concentración (carnero y toro)

·      Nº de servicios : la repetición frecuente y exagerada de saltos  diminuye de forma temporal el volumen.

·      grado de excitación  : es practica común este manejo para aumentar concentración y volumen del eyaculado.

·      método de colección : el uso de vagina artificial con temperatura , presión y lubricación adecuada da los mejores resultados , por mas  que los volúmenes de electroeyaculacion y masaje de vesículas seminales sean mayores al poseer  abundantes  secreciones de las glándulas anexas .

 

Los  volúmenes normales para las distintas especies son :

Þ  equino :  40 - 320 cc

Þ  ovino :    0,8 - 2 cc

Þ  caninos :  5 - 22 cc

Þ  verraco : 100 - 300 cc

Þ  toro : 5 - 15 cc

 

b - color :

El semen de carneros y toros es concentrado y su color es lechoso cremoso y opaco , la consistencia normal es cremosa.

En padrillo , cerdo y perro los espermatozoides están mucho menos  concentrados y el color es  blanco grisáceo y traslucido.

La coloración sufre modificaciones por la concentración de espermatozoides, por casos de orquitis (es amarronado por los pigmentos sanguíneos), se hace amarillento por exceso de riboflavina, pero cuando es  verdoso  es por causas infecciosas de pseudomona aureginosa; grumos  o copos son por presencia de pus por lo general proveniente de vesículas o gl accesorias; cuando la coloración es rojiza es por la presencia de sangre entera de pene, uretra o tracto genital. Algunos animales pueden npresentar un color amarillo normal por consumo de carotenoides.

 

c - motilidad en masa :

Es fácil de detectar en carnero , poco en toros, y no se ve en  caballo y cerdo por  la coloración blanco grisáceo del semen, ademas es poco concentrado.

Hay que tener cuidado en la recoleccion por el shock frio o bajas temperaturas que produce un decenso en la motilidad.

El primer eyaculado luego de un periodo de inactividad sexual tiene baja motilidad y muchos espermatozoides muertos. Puede realizarse a campo calentando el portaobjetos  o para mejor resultado se recomienda usar un microscopio con  platina termica. Esto indica que el semen siempre tiene  que ser evaluado a temperatura corporal para poder realizar lecturas precisas y comparativas.

La  motilidad se basa en el porcentaje estimado de espermatozoides moviles y su intensidad de movimiento.

Una buena motilidad por si sola no es un indicio de una buena fertilidad.

 

d - pureza : por la presencia de coloraciones que pueden ser patológicas.

 

 

3 - Examen microscópico ( a 10 X)

a - actividad cinética :

·      método : colocando una gota de semen en un P.O limpio, seco y entibiado a 37ºC se lleva a microscopio en objetivo panorámico.

·      evaluación : por medio de  cruces (+ + +)

Þ  motilidad en masa   buena                 (+++)

Þ  motilidad en masa   regular                (++)

Þ  motilidad en masa   mala                   (+)

Þ  motilidad en masa   nula                    (0)

 

b - densidad ( a 45 X) :

Es la cantidad de esperma por unidad de volumen, depende de la edad, alimentación, madurez, estado de salud, tamaño testicular y  frecuencia de recolección.

método : colocar una gota en el P.O limpio, seco y entibiado a 37º y observar en el borde de la gota la densidad del material con 450 aumentos.

 

Escala de valores e interpretación de la clasificación :

 

	clasificación	espermios/mm cubico	interpretación
DD	densisimo	mas de 1.500.000	se observa superposición de espermatozoides en el campo.
D	denso	800.000 - 1.500.000	se observa el campo lleno sin espacios vacíos entre ellos.
SD	semidenso	500.000 - 800.000	hay espacios entre los espermatozoides del tamaño de una cabeza de los mismos.
R	ralo	200.000 - 500.000	hay amplio espacio entre los espermios.
OS	oligoespermia	menos de 200.000	hay pocos espermatozoides y muchos espacios
A	azoespermia	ausencia de espermatozoides	no se ven espermatozoides.

 

c - motilidad individual :

·      método : colocar una gota  de material seminal sobre un porta, limpio, seco y entibiado a 37ºc con cubreobjeto; observar a un aumento de 100X y luego a 450 X , estableciendo el grado de intensidad y tipo de movimiento.

·      interpretación: los tipos de movimientos que podemos percibir son: normales (progresivo rectilíneo caudocefálico  y en línea recta); y  anormales (movimiento rotatorio circular, movimiento oscilatorio).

·      escala de valores  :            

Þ         5/5        80 - 100 %   de espermios con movimiento normal .

Þ         4/5       60 - 80 %

Þ         3/5       40 - 60 %

Þ         2/5       20 - 40 %

Þ         1/5       menos del 20 %  del espermatozoides con movimientos normales

Son aceptados como normales valores que oscilen entre 5/5 y 4/5.

 

 

d - determinación de células vivas y muertas :

·      coloración :  post-vital  con eosina nigrosina

·      método : colocar la gota sobre el P.O limpio, seco y a 37ºC , luego se agregan 2 gotas de eosina al 5% a  1/2 cm de la gota;  a ½ cm mas alla se agregan  4 gotas de nigrosinaal 10% ; se mezclan los colorantes entre si y luego con la gota de semen, tocar el preparado por ambos extremos con otro P.O y luego en un tercer P.O realizar el frotis, secar al aire y observar a mayor aumento.

·      interpretación  : contar 100 células , observándose  de coloración rosada las cel muertas  y sin colorear las vivas , el porcentaje aceptado como normal no debe exceder el 25 % de células muertas (entre 80 - 100 % de células vivas ).

 

e - determinación de anormalidades espermáticas : (técnica de contraste  con tinta china)

·      método : colocar una gota de semen en un P.O limpio, seco y a 37ºc , a ½ cm  se colocan 5 gotas de  tinta china, se mezcla, se toca la mezcla con otro porta  y se hace el frotis en un tercero, se seca al aire observándose en objetivo de inmersión.

·      interpretación : contar 100 células que aparezcan en el campo óptico sin colorear sobre un fondo oscuro, clasificarlas en 1ª , 2ª y normales.

Se consideran valores normales  hasta un 5 % de anormalidades primarias (en cabeza de espermatozoide), hasta un 15 % de anormalidades  secundarias (en pieza intermedia y cola).

 

·      Anormalidades ;

Son causadas por :

-congelación del escroto

-efecto combinado de  frío y viento

-hipoplasia testicular congénita

-aumento de temperatura

-degeneración testicular adquirida

-infección de órganos reproductores

-disfunción del epidídimo

 

 

q  Principales anormalidades  espermáticas:  (clasificadas por defectos de  cabeza , cuerpo y cola)

 

·      Anormalidades de la cabeza incluyen :

Þ  cabezas chicas (microcefalia)

Þ  cabezas grandes (macrocefalia)

Þ  cabezas  dobles

Þ  cabezas  estrechas

Þ  cabezas  retorcidas

Þ  cabezas  separadas o sueltas ; son causa de hipoplasia testicular parcial o de degeneración testicular.

Þ  Acrosoma desprendido ; por envejecimiento del epidídimo o técnica defectuosa de manipulación de semen.

Þ  Acrosoma  rugosos , nudosos o incompletos ; síntoma de infertilidad.

Þ  Acrosoma en botón ; frecuente en toro , carnero y cerdo, puede producir infertilidad al alterar la penetración de la zona pelucida.

Þ  acrosomas anormales

 

Las cabezas macrocéfalas son debido a un contenido cromosómico diploide, las desprendidas pueden deberse a agitado excesivo de la muestra.

Las cabezas desprendidas o sueltas pueden deberse a la agitación excesiva de la muestra  o a la extensión inadecuada del frotis.

 

 

 

·      Anormalidades del cuerpo :

ÞAnormalidades de la pieza intermedia: son comunes los  sacacorchos , falta de mitocondrias y pseudogota.

Þ  cuello hinchado

Þ  cuello arrollado

Þ  engrosamiento de pieza intermedia

Þ  pieza intermedia doble

Þ  pieza intermedia y colas sueltas

Þ  piezas intermedias con gotitas citoplasmáticas  proximales o dístales .

 

Las gotitas citoplasmáticas de pieza intermedia  se consideran normales en la cabeza del epidídimo , a medida que avanzan la gotita retrocede desde el cuello hacia la pieza intermedia y por lo común se pierde antes de que se emitan los espermios ; por lo tanto su aparición en el eyaculado indica la inmadurez de las células  o un pasaje demasiado rápido a través del epidídimo.

Las anormalidades  del cuerpo interfieren en la fertilidad al reducir la motilidad.

 

 

·      Anormalidades de la cola :

Þ  colas muy arrolladas ; es transmisible y se puede dar por enfriamiento rápido de semen.

Þ  colas dobles

Þ  colas cortas

     Þ  colas rotas

 

Son generalmente defectos epididimarios .

 

·      Otras anormalidades están dadas por la presencia en el eyaculado de  :

Þ  leucocitos

Þ  eritrocitos

Þ  células epiteliales escamosas de los conductos

Þ  células espermatogénicas  en forma de bote, son multinucleadas

Þ  espermátides

Þ  espermatocitos (esféricos)

Þ  células con  cuerpo en forma de medusa , células ciliadas desprendidas del epidídimo.

También pueden clasificarse en 2 grupos mas  que son : como formas primarias por trastornos del epitelio seminífero  y como formas secundarias producidas por el pasaje de las células por las vías genitales o durante su manipulación .

 

f - concentración espermática : este valor tiene una media de máximo rendimiento en los 4 años del reproductor.

·      contaje :  se realiza en cámara de contaje de glóbulos rojos

·      método : cargar una pipeta  de Potain hasta la graduación 0.5 con semen y enrasar con NaCl al 3 % , mezclar y descartar las 2 primeras gotas , secar el extremo. Colocar un cubre sobre el retículo de la cámara y cargarla tocando con el extremo de la pipeta ambos bordes del cubre en el lugar donde contacta con los retículos. contar las cabezas que se encuentran en 5 cuadrados mayores (en diagonal)y multiplicar por el factor de dilución.       

·      Valores normales :

Toro : 800.000 - 1.300.000 /mm3

Carnero : 1.000.000 - 2.500.000 /mm3

Equino : 100.000 - 320.000/ mm3

Verraco : 100.000 - 440.000 mm3

 

Método por fotocolorímetro ; al poner una solución con partículas en suspensión a través de un haz de luz , va a transmitir o absorber esa luz de acuerdo a la cantidad de partículas que tenga en suspensión. Si bien es objetivo , tiene su margen de error. El aparato debe ser previamente calibrado.

 

 

4 - Determinación de la actividad metabólica :

La esperanza  de un elevado grado  de asociación entre la actividad metabólica y la capacidad fertilizante de las células espermáticas no se ha confirmado.

Las determinaciones metabólicas que se han propuesto incluyen:

• El consumo de oxigeno
• La oxidación del piruvato.
• El índice de fructólisis.
• La reducción del azul de metileno.
• La reducción de la resazurina.
• Las variaciones del ph.

 

5 - Examen  bacteriológico y virológico.

Esta indicado en circunstancias especiales (infección de  hembras luego de apareamientos) la presencia  de leucocitos o pus en el eyaculado. El cultivo puede revelar infección con brucelosis , trichomonas o vibriosis.

Otro microorganismo que pueden encontrase son Corynebacterium renale , strepto , staphilo, leoptospiras, mycobacterium, Pseudomonas, Proteus; Mycoplasma ,Clamideas ,etc.

Al recoger  muestras de semen para estudios bacteriológicos o  vírales esencial observar practicas sanitarias e higiénicas estricta.

 

CÁLCULOS DE CONCENTRACIÓN ESPERMATICA

 

C = N  x 10.000 (dilución 1/200)

C = N  x 5.000 (dilución 1/100)

 

 

 

 

 

Limites fisiológicos ;

 

Dentro de los limites fisiológicos , da lo mismo que un toro tenga 3 % de anormalidades o 18% , no quiere decir que sea mas fértil que  otro. O sea , es normal que el semen tenga espermatozoides anormales, entonces se consideran normales los toros que tiene entre 3 % y 18% de anormalidades.

En cuanto a la pieza intermedia , se acepta un 2 % de anormalidades , en colas un 7% y gotas hasta un 5%.

 

 

% defectos	Toro	Carnero	Cerdo	Perro
Cabeza	3-18	1-3	7-8	9-11
Pieza intermedia	0-2	2-4	3	10
Cola	0-7	1-3	4-11	7
Gota proximal	0-5	0-3	1-3
Totales	15-20	7-20	15-30	15-30

 

Cualquier enfermedad que produzca fiebre, decúbito prolongado, puede ocasionar anormalidades espermáticas porque alteran la termorregulación y la producción de espermatozoides por el epitelio seminífero. Fundamentalmente las anormalidades espermáticas responden a una patología testicular o del epidídimo, pero también se puede dar por un problema de manejo de esa muestra.

Si tienen motilidad buen , pero el numero es bajo y no llega a un umbral determinado , entonces no va a poder producir fertilidad. Se necesita un numero mínimo  o básico de espermatozoides con cierta calidad para lograr la preñez. El umbral mínimo puede ser por ejemplo la dosis para inseminar.

La morfología y el numero de espermatozoides con motilidad progresiva son las características más importantes para revelar la capacidad de potencial de fertilización. Esto no es así para cuando hacemos un espermiograma para control de la calidad  de semen congelado.

Podemos decir que una muestra de semen es de buena calidad, pero esto no me indica que el animal sea fértil , porque puede haber por ejemplo aberraciones cromosómicas que no las vemos , enfermedades infecciosas , etc.

No podemos asegurar la fertilidad con el espermiograma pero es útil para predecirla.

Las pruebas de viabilidad más importantes son ; motilidad individual y vivos y muertos.

 

Parámetros que mas se correlacionan con índices de fertilidad :

 

	Toro de baja fertilidad	Toro de alta fertilidad
Tipo de experimento	I	II
Motilidad	22	77
Vigor (velocidad y forma de movimiento)	08	64
Tinción vital	33	67
Anormalidades	27	64

 

 

 

Experimento I : animal de baja fertilidad .

Experimento II: animal de alta fertilidad .

Motilidad individual: I = correlación baja ( 0,22) ; II= 0,77.

Vigor: vivacidad , cuan rápido se mueve el espermatozoide I = 0,88 , II= 0,64

Tinción vital (o de vivos o muertos) : buena correlación I= 0.33 ; II=0.67

Anormalidades:  I= 0.27 II= 0.64

 

Clasificación de anormalidades morfológicas de Blom

Defectos mayores: están relacionados con alteraciones en la fertilidad o con un estado anormal de los testículos-epidídimo. Ambas se combinan para una alteración total.

 

Defectos menores: parecen ser menos importantes y no se encuentran juntos. Interesarían unicamente cuando  un defecto menor sobrepasa el 10 al 15 %

 

 

DEFECTOS MAYORES:

1. Subdesarrollados
2. Formas dobles
3. Defecto espermatozoide nudoso
4. Defecto espermatozoide decapitado
5. Defecto Diadema (comp.. “formación bolsa”)
6. Cabeza piriforme
7. Estrechamiento en base
8. Contorno anormal
9. Cabezas anormales pequeñas
10. Cabezas anormales libres
11. Defecto de sacacorchos
12. Otros defectos de pieza media
13. Gotitas proximales
14. Defecto de pseudogotita.
15. Colas fuertemente dobladas o arrolladas.

 

 

DEFECTOS MENORES

16. Cabezas estrechas
17. Cabezas pequeñas normales
18. Cabezas gigantes y cortas y anchas
19. Cabezas libres (normales)
20. Caperuzas acrosómica desprendida.
21. Implantación abaxial
22. Gotitas distales
23. Cola sencillamente doblada o arrollada
24. Cola arrollada terminalmente.

 

 

 

Texto: Javier López